八種常用化療藥物組合對人類宮頸癌細胞體外藥物敏感試驗研究 - 圖文 - 下載本文

八種常用化療藥物組合對人類宮頸癌細胞

體外藥物敏感試驗研究

【摘要】目的:探討臨床宮頸癌原代腫瘤細胞對八種常用化療藥物組合方案的敏感性。方法 :采用ATP生物熒光法,對41例宮頸癌術中切下腫瘤組織標本進行體外細胞培養,再將紫杉醇,紫杉醇+順鉑,紫杉醇+卡鉑,托泊替康+順鉑,吉西他濱+順鉑,多西他賽;吉西他濱以及順鉑+環磷酰胺+多柔比星分別設定不同藥物濃度梯度(200%,100%,50.0%,25.0%,12.5%PPC即血漿峰值濃度),進行藥敏試驗。結果:8組化療藥物方案對宮頸癌的敏感性依次為:紫杉醇+順鉑>紫杉醇+卡鉑>紫杉醇>吉西他濱+順鉑>順鉑+環磷酰胺+多柔比星>托泊替康+順鉑>多西他賽>吉西他濱。結論:宮頸癌患者進行化療藥物敏感試驗具有可行性,對臨床個體化化療具有現實指導作用。

【關鍵詞】宮頸癌;原代腫瘤細胞;化療藥物;敏感性;體外培養

Eight Anticancer Drug Sensitivity Test of Cervical Carcinomas

by ATP-bioluminesence method

【Abstract】:Objective :To evaluate chemosensitivity of cervical carcinoma to 8 anticancer drugs were assayed in vitro using ATP- bioluminesence method. Methods: The chemosensitivity of 40 fresh specimens of human cervical tumors were tested with ATP-bioluminesence and eight anticancer drugs.Results: Chemosensitivities of cervical carcinoma to 8 anticancer drugs priority is :TAX+DDP>TAX+CBP>TAX>GEM+DDP>DDP+CTX+ADM> Topotecan+DDP>Docetaxel>GEM. Conclusion :The ATP-bioluminesence assay in vitro can predict chemotherapy for cervical carcinoma.

Key words:cervical carcinoma; pro-generation tumor cells; chemotreatm-ent drug; susceptiveness; cultivation in vitro .

宮頸癌是女性生殖系統三大惡性腫瘤之一,其發病率居婦科惡性腫瘤之首。近年來發病率呈上升和年輕化趨勢。宮頸癌的治療模式為手術及放療,化療僅僅

用于不能手術的晚期患者的姑息治療或手術前新輔助治療[1]。隨著醫療技術的不斷發展,臨床治療的不斷深入,醫療工作者發現手術和放療不能控制和消除亞臨床病灶和微小轉移病灶。隨著化療藥物的不斷更新換代、里程碑式的跨越,給藥方法和給藥途徑的不斷改善。選擇針對個體有效的藥物進行化療是治療婦科惡性腫瘤的重要手段之一。本研究通過參考近年來國內外有關文獻[2][3]選擇八種一線及二線的宮頸癌化療藥物方案,化療前對個體宮頸癌細胞進行藥物體外敏感試驗,對其細胞毒性進行比較,選擇出有效的單藥或有效(或敏感)聯合藥物組成的化療方案,為臨床個體化化療提供依據。

1.材料與方法

1.1 一般資料 收集2013年-2014年在本院手術治療的宮頸癌(經病理確診)患者41例標本,最小年齡24歲,最大年齡68歲。其中鱗癌32例;腺癌8例;宮頸腺泡狀橫紋肌肉瘤1例。

1.2 材料 ATP-TCA[11]試劑盒,由湖州海創生物科技有限公司提供。化療藥物:紫杉醇(TAX,百時美施貴寶公司),順鉑[4](DDP,江蘇豪森藥業),卡鉑[5](CBP, 齊魯制藥),托泊替康[6](Topotecan,葛蘭素史克),吉西他濱[7](GEM,ELI LILLY AND COMPANY),多西他賽[8](Docetaxel,江蘇恒瑞醫藥);環磷酰胺(CTX,Toronto Research Chemicals Inc.),多柔比星[9](ADM,深圳萬樂藥業)。均為一般臨床制劑。其濃度依據臨床用藥的有效血藥濃度確定。具體試驗濃度如表一。

表一 八種化療藥物試驗濃度

藥物

100%PPC(ug/ml)

TAX DDP CBP

Topotecan

GEM Docetaxel CTX ADM

13.8 6.3 25 0.75 25 10 3 3

1.3 方法 ATP-TCA操作步驟:取手術切除的新鮮腫瘤組織標本,去除其表面的凝血塊及壞死組織等,剪碎、離心,加入組織消化酶溶液,充分消化后離心,去上清,收集細胞懸液,調整細胞濃度至10~30萬/ml,加入96孔細胞培養板中,置37℃、5%CO2培養箱中培養4 h后,加入化療藥物,每個藥物設5個濃度(200%,100%,50.0%,25.0%,12.5%PPC),同時設空白對照(不含腫瘤細胞)及對照孔(含

腫瘤細胞但不加化療藥物),于5%CO2、37℃、95%濕度下孵育5~7天。加入腫瘤細胞ATP提取液,混勻后室溫下15min,取0.05ml混合液置微板熒光分析儀檢測[11]。按下式計算各個化療藥物的抑制率: 抑制率= (1-試驗孔ATP量/對照組ATP量)×100%

抑制率≥70%為高度敏感;50%~70%為敏感;30%~50%為低度敏感;<30%為耐藥;當抑制率≥50%時可以推薦臨床使用。

2.統計學方法 本試驗所有數據采用SPSS 13.0 軟件進行統計分析。 采用GraphPad Prism 5.0軟件作圖。 3. 結果

3.1 ATP標準曲線[10] 用于質控,用于每次使用系統時的發光測試及實驗結果異常時的校驗。取各濃度測得的發光均值,以稀釋濃度的LG對數值為自變量,以測定結果均值的LG對數值為因變量繪制標準曲線確定線性度,在ATP標準品濃度10-11~10-6mol/ml范圍內,二者呈良好的直線相關關系。相關系數r ≥0.975,對r進行t檢驗,P<0.001。 3.2 ATP生物發光法檢測結果

在總共收集的41例病人中,41例均具有可評估性。總可評估率約為:100%。在血漿峰值濃度下藥物對宮頸鱗癌與腺癌的抑制率均值見表二。在血漿峰值濃度下藥物對宮頸鱗癌與腺癌的抑制率對照見圖一。

表二:血漿峰值濃度下藥物對鱗癌與腺癌的抑制率均值(%)

病理 藥物

TAX TC TP

Docetaxel

GEM+

DDP

DDP+CTX+ADM

GEM

Topotecan+DDP

鱗癌 腺癌

89.71 93.89 98.07 87.98 97.29 92.62

65.17 65.58

75.28 96.60

70.62 89.70

46.60 39.70

71.56 70.13

圖一:血漿峰值濃度下藥物對鱗癌與腺癌的抑制率對照

另外,宮頸腺泡狀橫紋肌肉瘤1例的癌細胞藥物的敏感性:TAX單藥為高度

敏感,TAX+CBP方案為敏感,DDP+CTX+ADM方案為低度敏感,其余均為耐藥。

以上試驗結果顯示:在血漿峰值濃度下,對于宮頸鱗癌化療藥物的抑制率依次為:TAX+DDP>TAX+CBP>TAX>GEM+DDP>Topotecan+DDP>DDP+CTX+ADM>Docetaxel>GEM。在血漿峰值濃度下,對于宮頸腺癌化療藥物的抑制率依次為:TAX+CBP>GEM+DDP>TAX+DDP>DDP+CTX+ADM>TAX>Topotecan+DDP>Docetaxel>GEM。然而,宮頸癌不同組織病理學藥物敏感性的差異根據SPSS軟件統計P=0.3360(P>0.05),差異尚不具有統計學意義。

資料收集的41例宮頸癌細胞在不同濃度梯度下八組藥物的腫瘤生長抑制率均值(%)見表三,八組化療藥物對宮頸癌細胞體外敏感試驗結果對照見圖二。

表三:不同濃度梯度下八組藥物的腫瘤生長抑制率均值

濃度 藥物

TAX TC TP

GEM+

Docetaxel

DDP

DDP+CTX+ADM

GEM

Topotecan+DDP

200%PPC 100%PPC 50%PPC 25%PPC 12.5PPC

96.98 97.95 99.31 89.31 94.49 96.71 71.44 79.05 86.14 54.43 59.07 68.37 42.12 46.35 48.93

81.94 65.30 49.74 40.19 34.24

81.57 77.94 69.76 58.02 44.62

80.64 75.11 66.72 48.37 32.09

50.57 26.61 26.51 26.54 24.42

76.08 71.41 59.70 45.52 36.42

圖二 八組化療藥物對宮頸癌細胞體外敏感試驗結果





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